Soutenance de thèse de Juan BLAZQUEZ ROMAN

Chez la plupart des primates adultes, les lymphocytes T-Vgamma9Vdelta2 représentant la majorité des LT gammadelta circulants, jouent un rôle fondamentale dans l’immunité anti-infectieuse et anti-tumoral grâce à son capacité d’identifier l’accumulation pathologique des phosphoantigènes dans les cellules infectées/ transformées. Dans ce contexte, les molécules BTN3A (glycoprotéines membranaires) ont été identifiées comme les médiateurs principaux impliqués dans l’activation des cellules Vγ9Vδ2 induite par les phosphoantigènes. Les travaux développés durant la thèse visent à étudier, grâce à la méthode CRIPSR-Cas9, l’importance relative de chaque paralogue de BTN3A (BTN3A1, BTN3A2, BTN3A3) dans l’activation des cellules gammadelta. Nous avons ensuite approfondit dans la façon les molécules BTN3A interagissent dans les cellules tumorales afin d’activer les lymphocytes Vγ9Vδ2 grâce aux méthodes de Co-IP et FRET. En parallèle, nous avons finalement mis en évidence la surexpression des molécules BTN3A chez les cellules tumorales après stimulation avec l’IFNgamma et, en autre, on a pu montrer comme l’stimulation des cellules tumorales avec l’IFNgamma induise une meilleure activation des lymphocytes T-Vgamma9Vdelta2 contre ses cibles. En fin, l’ensemble des travaux ont permis d’apporter des nouveaux indices permettant d’approfondir dans la caractérisation fonctionnelle des protéines BTN3A qui doivent être exprimées dans les cellules cibles afin d’activer les lymphocytes Vγ9Vδ2, ainsi que les interactions entre les différents membres de la famille des protéines BTN3A, avec ou sans phosphoantigènes. En autre, on démontre aussi que l’stimulation des cellules cibles avec l’IFNgamma; améliore la reconnaissance des les lymphocytes T-Vgamma9Vdelta2 de la cellule tumorale.

In most primates, peripheral blood Vgamma9Vdelta2-T cells are known to play a major role in anti-infectious and anti-tumor immunity thanks to their capacity to identify small pyrophosphate molecules termed phosphoantigens (PAg), which tend to accumulate in transformed/infected cells. In this regard, BTN3A molecules (membrane glycoproteins) were identified as key mediators of Vgamma9Vdelta2-T cells activation induced by phosphoantigens. The main body of this thesis aims to decipher, by gene-deletion approaches (CRISPR-Cas9), the relative relevance of each BTN3A paralogue (BTN3A1, BTN3A2 and BTN3A3) in the activation of Vgamma9Vdelta2-T cells, upon phosphoantigens’ intracellular accumulation. Hereafter, we have deepen in the way BTN3A proteins interact between each other in tumor cells to activate Vgamma9Vdelta2-T cells by Co-IP and FRET. Last but no least, we also demonstrate that IFNgamma; is involved in the regulation of BTN3A expression and, in addition, we evidence that IFNgamma; stimulation of tumor cells improves the activation of Vgamma9Vdelta2-T cells against their targets. To sum up, the set of works performed during the thesis provide new insights about BTN3A proteins’ functional and physical interactions required to fully activate Vgamma9Vdelta2-T cells, in absence or presence of phosphoantigens. Besides that, we also demonstrate that IFNgamma; stimulation of cancer cells generally improves Vgamma9Vdelta2-T cells’ recognition of target cells, when triggering BTN3A activation by different approaches.